地高辛标记Nkx2.1基因RNA探针的制备及应用

目的 制备地高辛(digoxigenin,DIG)标记的Nkx2.1基因RNA探针,用于小鼠胚胎早期神经管发育关键时期Nkx2.1基因表达的检测.方法 巢式PCR法扩增Nkx2.1基因,将其克隆至pGEM-T载体;以其为模板,通过Nkx2.1特异性引物,PCR扩增RNA探针转录模板;采用T7 RNA聚合酶,制备DIG标记的正义、反义Nkx2.1 RNA原位杂交探针.经全胚胎原位杂交(whole-mount in situ hybridization,WM-ISH)技术分析胚胎8.5、9.5、10.5d小鼠体内Nkx2.1基因的表达情况.结果 制备的探针浓度为1 521.986 ng/mL,纯度A260/280=2.39.Nkx2.1基因反义探针能高效检测到Nkx2.1基因在胚胎8.5、9.5及10.5 d小鼠神经系统中表达,正义探针未能检测到表达信号.结论 成功制备了特异高效的DIG标记的Nkx2.1基因RNA原位杂交探针,为进一步研究Nkx2.1基因在小鼠胚胎组织中的表达,探索其在神经管发育中的作用机制奠定了基础.