发色底物检测法用于人纤维蛋白溶酶原纯化工艺的可行性分析

目的 分析发光底物检测法用于人纤维蛋白溶酶原(plasminogen,Pg)纯化工艺的可行性.方法 采用纤溶酶原测定试剂盒对ACL7000血凝仪运行发色底物法的性能进行确认;并对该方法的线性范围、准确度、精密度、选择性进行验证;应用Softmax及Statistic软件分析定标血浆及Pg纯化样品检测结果的平行性;采用验证的方法检测Pg全层析工艺样品的效价及目标样品存贮稳定性.结果 ACL7000血凝仪运行发色底物法的性能稳定.定标血浆标准曲线线性范围为0.128～1.28 U/mL,稀释样品回收率在92％～103％之间,R2≥0.99;定标血浆的高、中、低值、检测下限及正常质控血浆(control plasma normal,CPN)效价回收率批内及批间分别在91％～108％和94％ ～107％之间,批内及批间CV分别在0.5％～1.9％和0.3％～1.4％之间;Pg纯化各段层析缓冲液所含特殊组分除1％ Tween80+0.3％磷酸三丁酯外对Pg效价检测无影响.纯化样品Pg效价检测曲线与定标血浆曲线平行.全层析工艺Pg半成品的比活性达8U/mg以上,效价总回收率达50％以上;Pg亲和层析洗脱液在-30℃保存42d、18～25℃及2～8℃保存7d效价稳定,Pg半成品在-30℃保存68 d、18～25℃及2～8℃保存38 h效价稳定.结论 纤溶酶原测定试剂盒(发色底物法)具有较好的线性范围、准确度、精密度和选择性,ACL7000血凝仪运行该方法可用于Pg全层析工艺样品的效价检测,本实验为Pg纯化工艺研究奠定了基础.