重组人神经生长因子在大肠埃希菌中的表达及活性测定

目的 在大肠埃希菌中表达重组人神经生长因子(recombinant human nerve growth factor,rhNGF),并检测其活性.方法 通过密码子优化,设计表达rhNGF的基因,构建重组表达质粒pET-28a(+)-hNGF,转化大肠埃希菌BL21pLyS(DE3)中,IPTG诱导表达.表达的蛋白经层析纯化后,SDS-PAGE及HPLC法检测纯度,Lowry法检测蛋白浓度,TF-1细胞增殖法检测生物学活性.结果 构建了融合表达rhNGF的大肠埃希菌表达系统,表达的3批外源蛋白纯化后纯度均达到100％,比活分别为5.5× 105、6.8× 105和7.4×105IU/mg,均高于小鼠颌下腺提取的NGF标准品.结论 成功表达了rhNGF,纯化后纯度高,比活强,为规模化生产hNGF提供了参考.