人用疫苗生产用细胞、胰酶及疫苗成品中猪细环病毒PCR检测方法的建立及验证

目的 建立人用疫苗生产用细胞、胰酶及疫苗成品中猪细环病毒(Torque teno sus virus,TTSuV)的PCR检测方法,并进行验证.方法 根据GenBank中登录的TTSuV1 (JN688927)及TTSuV2 (AY823991)的序列,合成TTSuV1及TTSuV2基因组部分DNA序列,连接于PUC57质粒上,制备重组质粒,以重组阳性质粒DNA为模板,PCR扩增316 bp的TTSuV1片段及252 bp的TTSuV2片段,同时验证方法的灵敏度和特异性.并采用该方法对2批0.1％胰酶、Vero、KMB17、MRC5、Hep2、BT细胞及6批疫苗[3批Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated poliomyelitis vaccine made from Sabin strain,SIPV)收获液、1批SIPV成品、1批冻干甲型肝炎减毒活疫苗[hepatitis A(live) vaccine,freezedried,fHAV]成品、1批肠道病毒71型(enterovivus type 71,EV71)灭活疫苗成品]进行检测.结果 建立的PCR法最低分别可检出10 fg/μL TTSuV1和0.01 fg/μL TTSuV2的目的基因;该方法可特异性扩增出TTSuV1和TTSuV2的目的基因条带.2批0.1％胰酶、Vero、KMB17、MRC5、Hep2、BT细胞及6批疫苗均未检出TTSuV1及TTSuV2.结论 成功建立了疫苗生产用原材料、细胞、疫苗收获液及成品中TTSuV的PCR检测方法,且该方法具有较高的灵敏度和特异性,可用于本所疫苗生产中对TTSuV的检测.