脊髓灰质炎假病毒的制备及其检测方法的分析

目的 分析不同试剂和方法制备脊髓灰质炎假病毒的包装效果,并比较不同检测方法的有效性.方法 比较转染试剂(PEI、polyfect、jetPRIME、Effectene)、骨架质粒转染形式(pcDNA3.1-P1与Replicon共转染;pcDNA3.1-P1转染表达24h后,转染Replicon;pcDNA3.1-P1与线性化的pRepluc共转染;pcDNA3.1-P1转染表达24h后,转染线性化的pRepluc)、衣壳蛋白质粒与骨架质粒的质量(μg)比(分别为1∶1、1∶2、1∶3、2∶1、2∶2和2∶3)对制备假病毒效率的影响.获得的假病毒颗粒分别用报告基因荧光素酶活性检测法、荧光定量RT-PCR法、ELISA方法检测效价,并进行相关性分析.结果 单独转染衣壳蛋白质粒或骨架质粒时,转染效果最佳试剂分别为jetPRIME和Effectene,当转染体系为共转染,转染试剂以Effectene为准;骨架质粒以RNA形式在衣壳蛋白转录后24h转染,或以线性化质粒形式与衣壳蛋白共转染,效果差异无统计学意义(P＞0.05);衣壳蛋白质粒与骨架质粒的比值为1∶2和1∶3时均可得到效价较高的假病毒.检测假病毒效价时,报告基因萤光素酶活性与核酸拷贝数具有一致性,病毒的核酸拷贝数与效价在0.01水平上显著相关,病毒颗粒的D抗原含量与效价在0.05水平上显著相关.结论建立了制备Sabin株假病毒的方法,并验证了荧光素酶检测假病毒效价的有效性.