人呼吸道合胞病毒截短F1蛋白的原核表达及其免疫原性评价
Chinese Journal of Biologicals（2017）
Abstract
目的 原核表达重组人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)A型Long株截短F1融合性蛋白,并评价其免疫原性.方法 采用RT-PCR法扩增HRSV截短F1蛋白基因序列,克隆至pET-28b表达载体,构建重组原核表达质粒RSV F1/pET-28b,转化大肠埃希菌Shuffle T7菌株,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析;用Ni亲和层析柱纯化,纯化产物经SDS-PAGE及Western blot分析.将纯化的重组截短F1蛋白免疫ICR小鼠,ELISA法检测小鼠血清抗体效价.结果 重组原核表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的截短F1蛋白相对分子质量约44 000,主要以包涵体形式存在,纯度达90.6％.重组截短F1蛋白免疫小鼠血清抗体效价最高可达1∶4 096.结论 原核表达的重组HRSV截短F1蛋白免疫原性好,为单克隆抗体的制备及检测试剂盒的研究奠定了基础.
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Human respiratory syncytial virus (HRSV),Truncated F1 protein,Prokaryotic expression,Immunogenicity
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