人颗粒酶B融合蛋白的原核表达及其免疫血清的制备

目的 在原核体系中表达人颗粒酶B(granzyme B,GzmB)融合蛋白,并制备GzmB免疫血清多克隆抗体.方法 构建GzmB原核表达重组质粒pET32a-GzmB,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达重组GzmB (rGzmB)蛋白,镍离子螯合亲和层析柱纯化表达产物.以纯化的rGzmB蛋白为免疫原,皮下多点注射BALB/c小鼠,共免疫3次,分别于免疫后2、4、6周经小鼠尾静脉采血,分离血清,间接ELISA法检测免疫血清中GzmB特异性IgG抗体水平,并确定其抗体最大稀释度,免疫斑点试验检测免疫血清多克隆抗体对GzmB的特异免疫结合特性.结果 质粒pET32a-GzmB经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的rGzmB蛋白相对分子质量为48 000;纯化的rGzmB蛋白免疫小鼠血清中GzmB特异性IgG抗体水平随免疫时间延长至第4周达到高峰,随后维持一定水平;抗体最大稀释度为1∶1600;rGzmB免疫血清能够特异地结合GzmB,显示了其免疫结合特性.结 论制备了rGzmB蛋白和GzmB小鼠免疫血清多克隆抗体,为后续开展GzmB的靶向杀伤、靶向检测等应用研究奠定了基础.