结核分枝杆菌肝素结合血凝黏附素的原核表达及其在结核病血清学诊断中的应用

目的 原核表达与纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)肝素结合血凝黏附素(heparin-bindinghaemagglutinin adhesion,HBHA),并初步评估其在结核病血清学诊断中的价值.方法 采用PCR法从M.tbH37Rv基因组中扩增hbha基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达质粒pET-28ah,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组HBHA(rHBHA)蛋白经Ni2+亲和层析柱纯化后,Western blot法分析其抗原特异性.收集71例确诊的结核病患者和30名健康体检者血清,采用ELISA法检测血清中的抗HBHA IgA、IgG抗体水平,并以ESAT-6、Ag85A作为对照抗原,评估rHBHA在结核病血清学诊断中的价值.结果 重组表达质粒pET-28ah经酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在,经Ni2+亲和层析柱纯化,可得到高纯度的rHBHA蛋白;纯化的rHBHA蛋白可与小鼠抗His-tag单克隆抗体特异性结合;结核病患者(TB)组血清中抗rHBHA、ESAT-6、Ag85A抗原特异性IgG水平均显著高于健康对照(HC)组(P＜0.05),且TB组的rHBHA抗原特异性IgA水平也显著高于HC组(P＜0.05),而两组间ESAT-6、Ag85A抗原特异性IgA水平差异无统计学意义(P＞0.05);ROC曲线分析显示,rHBHA抗原检测IgA的诊断效能较好,曲线下面积为0.711,其他两种对照抗原ESAT-6、Ag85A的IgA诊断效能一般,曲线下面积分别为0.512和0.531.结论 rHBHA抗原用于结核病的诊断效能较好,可作为结核病血清学诊断的备选抗原之一.