水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E胞外区的真核表达及鉴定

目的 真核表达水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)糖蛋白E胞外区(gE537),并进行鉴定.方法 用Oka株VZV(VZV-Oka)感染人二倍体细胞(2BS株),提取基因组DNA,以其为模板,PCR扩增gE537目的片段,克隆至载体pCI-neo,构建重组真核表达质粒pCI-neo-gE537-His.大量扩增后提取质粒,转染293FT细胞,瞬时表达,经镍柱纯化,获得目的蛋白gE537-His,Western blot和ELISA法进行鉴定.结果 经双酶切及测序鉴定,重组真核表达质粒pCIneo-gE537-His构建成功.200 mmol/L咪唑洗脱液为洗脱目的蛋白的最佳咪唑浓度.纯化产物可与鼠抗gE糖蛋白单抗于相对分子质量约90 000处发生特异性结合,且可与mAb-10、mAb-12抗gE单抗发生反应.结论 利用293FT细胞成功表达了gE537,为其免疫原性等相关研究奠定了基础.