大规模纯化脊髓灰质炎病毒的蔗糖垫层离心法的建立

目的 建立可大规模纯化脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)的蔗糖垫层离心法.方法 病毒大量增殖后,收集病毒液,经PEG浓缩、三氟三氯乙烷抽提后,采用蔗糖垫层或CsCl密度梯度离心法纯化Pv(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型),电镜下观察病毒形态,进行核酸及感染性滴度的检测.将纯化的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型PV免疫豚鼠,心脏采血,分离血清,微量中和试验法检测血清中和抗体滴度.结果 蔗糖垫层离心法纯化的各型PV,病毒颗粒形态典型,背景清晰,除完整的光滑型病毒颗粒外,还可见大量空心病毒颗粒样品,纯化效果较好;CsC1密度梯度离心法纯化的PV样品,病毒形态也较典型,但完整的病毒颗粒较多.两种纯化方法获得的病毒基因组核酸特征显著,背景清晰,无明显差异.蔗糖垫层离心法纯化的各型PV的感染性滴度及免疫后豚鼠血清中和抗体滴度均高于CsC1密度梯度离心法.结论 蔗糖垫层离心法纯化的PV纯度高,免疫原性好,可用于大规模纯化PV或其他病毒.