原核增强子样序列筛选及其功能区域鉴定
Chinese Journal of Biologicals（2015）
Abstract
目的 从污水和土壤中富集的微生物菌体中筛选原核增强子样序列,构建包含增强子样序列的表达载体,并通过构建缺失突变体鉴定其功能区域.方法 将人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)主要衣壳蛋白基因L1截短序列L11与氯霉素乙酰转移酶基因(chloramphenicol acetyltransferase,CAT)连接,作为报告基因,从污水和土壤富集的微生物菌体中筛选具有增强子活性的序列,构建包含增强子样序列的表达载体,表达HPV L11蛋白,检测其增强活性;通过构建ER1的缺失突变体,测定不同突变体对L11蛋白表达的作用情况,确定其功能区域.结果 从样品基因组DNA中筛选出1条具有一定增强蛋白表达功能的增强子样序列,可使检测菌株氯霉素抗性提高5倍,HPVL11蛋白表达水平提高1.78倍.其增强活性主要位于117 ～ 317 bp区域.结论 从污水和土壤中成功筛选到1条增强子样序列,携带有增强子样序列的表达载体可提高目的蛋白表达水平.
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Enhancer-like sequence,Screening,Exogenous gene,Protein expression,Domain
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