蔗糖密度梯度离心法纯化流感病毒工艺的优化

目的 优化蔗糖密度梯度离心法纯化流感病毒的工艺参数.方法 在不同进样量(600、700和800 ml)时,检测经蔗糖密度梯度离心纯化后各紫外检测峰的糖浓度、血凝滴度及卵清蛋白含量,并对血凝滴度大于1:480的检测峰样品进行蛋白质含量和血凝素含量检测,确定最佳收峰位置、糖度范围及病毒浓缩液进样量;在不同比例的30％和50％的蔗糖溶液、不同离心时间(2、3和4h)条件下对流感病毒浓缩液进行蔗糖密度梯度离心纯化,检测纯化后的病毒纯化液蛋白质、血凝素及卵清蛋白含量,计算蛋白质含量与血凝素含量比值及血凝素回收率,确定最佳离心时间.结果 确定最佳收峰位置为第三峰,糖度范围为30％～ 50％之间;当病毒浓缩液进样量为600 ～ 700 ml时,30％蔗糖溶液进液量为450 ～ 550 ml,55％蔗糖溶液进液量为400～500 ml,转速为90 639×g离心3h后,可获得最佳纯化效果.结论 确定了蔗糖密度梯度离心法纯化流感病毒的最佳工艺参数,为进一步提高流感病毒的纯化效果提供了参考.