反相高效液相色谱法测定注射用重组人干扰素β1b中干扰素β1b的含量

目的 建立测定注射用重组人干扰素β1b(recombinant human interferon β1b,rhIFNβ1b)成品中干扰素β1b(interferon β1b,IFNβ1b)含量的反相高效液相色谱法(reversed phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC).方法 采用色谱柱ZORBAX 300SB-C18(4.6 mm× 250 mm,5μm),以含95％水、5％乙腈、0.1％三氟乙酸的混合液为流动相A液,以含5％水、95％乙腈、0.1％三氟乙酸的混合液为流动相B液,流速为1.5 ml/min,梯度洗脱10 min(A液从70％ ～ 30％),检测波长为214 nm,柱温为35℃,进样量为20μl.对该方法的适用性、线性、精密度、重复性和准确度进行验证.用建立的方法检测3批注射用rhIFNβ1b成品中IFNβ1b的含量.结果 建立的方法系统适应性良好;IFNβ1b在20～100 μg范围内,与峰面积呈良好的线性关系,r2=0.998;供试品溶液连续6次进样,峰面积的相对标准偏差(RSD)为0.97％;6份同一批供试品IFNβ1b含量的平均值为302.83 μg/ml,RSD为0.99％;40、60和80 μg/ml的IFNβ1b加标平均回收率分别为93.1％、94.18％和93.67％,RSD均＜2％.3批注射用rhIFNβ1b成品中IFNβ1b的含量分别为389.8、364.5和304.6 μg/ml.结论 建立的RP-HPLC法操作简便,精密度、重复性、准确度好,可用于测定注射用rhIFNβ1b成品中IFNβ1b的含量.