人线粒体DNA聚合酶基因的克隆及序列分析
Chinese Journal of Biologicals（2015）
Abstract
目的 克隆人线粒体DNA聚合酶(polymerase gama,Polγ)的全长编码基因POLG,并进行序列分析.方法 参考GenBank中登录的POLG cDNA序列设计2对特异性引物,采用RT-PCR法分别从HeLa细胞中进行分段扩增,再克隆至载体pMD18-T中,经双酶切及测序鉴定后拼接POLG全长基因,应用Phylip软件绘制系统进化树,分析Polγ与其他物种间的系统进化关系.结果 双酶切及测序鉴定证明,重组质粒构建正确;人POLG基因位于西部低地大猩猩所形成的基础分支中,与其亲缘关系较近的物种包括黑猩猩和倭黑猩猩等高等灵长类哺乳动物.结论 成功克隆了人Polγ基因,其变异较大,物种间差异显著,本实验为Polγ酶活性和酶作用机制的研究奠定了基础.
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Human mitochondrial DNA polymerase,Cloning,Sequence analysis
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