人星状病毒非结构蛋白nsP1a/3的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备

目的 原核表达、纯化人星状病毒(human astrovirus,HAstV)非结构蛋白nsP1a/3,并制备多克隆抗体.方法 酶切质粒nsP1a/3-pCDNA3.1,获得nsP1a/3基因,克隆至原核表达载体pET-28a,构建重组原核表达质粒nsP1a/3-pET-28a,转化大肠埃希菌BL2(DE3),IPTG诱导表达,并优化表达条件.表达的重组蛋白经Ni2+亲和层析纯化后,经腹腔免疫SD大鼠,共4次,最后1次免疫7d后,经心脏采血,分离血清,ELISA法检测多抗效价,Western blot鉴定多抗的特异性.结果 重组表达质粒nsP1a/3-pET-28a经双酶切和测序鉴定构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为22 500,以包涵体形式表达;纯化的重组蛋白纯度为86.6％,浓度为1.26 mg/ml;制备的多克隆抗体效价较高,可达1:30 000,且特异性较好.结论 成功地原核表达、纯化了HAstV非结构蛋白nsP1a/3,并制备了特异性良好的鼠多克隆抗体,为进一步研究nsP1a/3蛋白在病毒侵染靶细胞时的作用机制奠定了基础.