Asia 1型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因真核表达质粒的构建及鉴定

目的 构建Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)P1-2A-3C基因真核表达质粒.方法 采集疫区牛的水疱液及水疱皮,经RT-PCR法扩增出Asia 1型FMDV的前体蛋白基因P1-2A片段和蛋白酶基因3C片段,分别克隆至pMD18-T载体上,通过酶切、连接,获得质粒pMD18-T-P1-2A-3C.经酶切获得P1-2A-3C片段,插入真核表达载体pVAXⅠ pCMV启动子下游,构建pVAXI-P1-2A-3C真核表达载体,用脂质体法转染HeLa细胞,进行IFA检测.结果 Asia 1型FMDV真核表达载体pVAXⅠP 1-2A-3C,经酶切鉴定证明构建正确,转染HeLa细胞后,可见明显的黄绿色荧光,表明P1-2A-3C基因得到了表达.结论 pVAX Ⅰ-P1-2A-3C可作为Asia 1型FMD核酸疫苗的候选疫苗.