Fisetin对H2O2诱导细胞内ROS的清除作用及机制探讨

活性氧(reactive oxygen species,ROS)在非酒精性脂肪肝、心血管疾病、癌症、糖尿病等疾病发生发展的过程中具有重要作用.HepG2细胞是评价抗氧化剂对活细胞氧化损伤保护作用的常用细胞模型.为了探讨非瑟酮(fisetin)对H2O2诱导细胞内ROS的清除作用及其机制,将HepG2细胞随机分为空白对照组(control)、溶剂对照组(solvent control)、H2O2模型组(H2O2 model group)、fisetin干预组(fisetin+H2O2)、fisetin单独处理组(fisetin),检测不同干预组细胞存活率大小及细胞内ROS水平,同时检测核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor2,Nrf2)、Kelch样ECH相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)及Ⅱ相酶血红素氧合酶-1 (heme oxygenase-1,HO-Ⅰ)、谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚基(glutamate-cysteine ligase catalytic subunit,GCLC)、谷氨酰半胱氨酸连接酶修饰亚基(glutamate-cysteine ligase modifer subunit,GCLM)、醌氧化还原酶1(NAD(P)H quinone oxidoreductase 1,NQO1)的表达.此外,通过构建Nrf2敲低细胞系,进一步明确Nrf2在fisetin清除ROS过程中的作用.研究发现,与H2O2模型组相比,fisetin干预组细胞存活率显著上升;fisetin可抑制由H2O2引起的HepG2细胞内ROS的增加,上调Nrt2、HO-1蛋白表达,并下调Keap1蛋白表达;Nrf2稳定敲低后,细胞内ROS水平增加.实验结果表明,fisetin可能通过激活Keap 1/Nrf2/抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)通路诱导HO-1的表达,从而在抗氧化损伤过程中发挥细胞保护作用.