抑制CYP4A11基因表达的siRNAs优选及对血管收缩相关因子的影响

为了考察人细胞中细胞色素P450 4A11 (CYP4A11)表达受抑制之后是否会影响血管相关收缩因子的表达,在线设计多个抑制细胞中代谢酶编码基因CYP4A 11表达的siRNAs并通过BLAST验证;选择效果好的3对siRNAs合成并转染至EA.hy926细胞株,通过荧光染色和定量多聚酶链反应(quantitative polumerase chain reaction,qPCR)初步检测后,再采用表达量相对更高的MG63细胞系进行验证,发现25 nmol/L的siRNA2抑制效果最好;随后使用25 nmol/L siRNA2抑制CYP4A 11在EA.hy926细胞株中的表达,并通过qPCR与Western-blot检测血管收缩相关因子的表达情况,发现促血管收缩相关因子内皮素1受体(endothelin1 receptor,ET1R)、血管紧张素1型受体(angiotensin type 1 receptor,AT1R)表达下调(P＜0.05),而内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的表达显著上调(P＜0.001).因此,siRNA2能通过显著抑制EA.hy926细胞中CYP4A 11的表达,调节血管紧张的相关指标,有促血管松弛作用的趋势.