高糖通过诱导自噬障碍促进心肌细胞H9c2凋亡

目的 探讨自噬对高糖(HG)诱导的心肌细胞H9c2凋亡的影响.方法 MTT法检测H9c2细胞活力;hoechst33258染色法检测凋亡细胞;Western Blot检测H9c2细胞促凋亡蛋白Bax和自噬相关蛋白(Beclin-1和P62)的表达.各组的OD值和蛋白条带灰度值均采用析因设计的方差分析,各组间差异用单因素ANOVA分析.结果 HG能诱导H9c2细胞活力降低:12、24、48 mmol/L的HG细胞活力分别为Control组(100 %)的[(79.5±2.23)% ](t = 3.143, P=0.043)、[(54.6±3.08)%](t=12.425,P=0.000)和[(37.2±2.59)%](t=13.761,P=0.000);与Control组(100%)比较,甘露醇等渗对照组的细胞活力值为[(101.0±1.27)%](t?= 0.012, P=0.094).HG诱导H9c2细胞hoechst33258阳性细胞增加,且能诱导促凋亡蛋白Bax表达增加:与Control组比较,12、24、48 mmol/L的HG处理组凋亡蛋白Bax/β-actin灰度值分别为(1.29±0.25,t = 2.32,P = 0.045)、(1.42±0.23,t = 10.247,P = 0.000)和(1.81±0.29,t = 16.324, P=0.000).HG诱导自噬障碍:与Control组比较,自噬相关蛋白Beclin-1/β-actin灰度值分别为(0.82±0.16,t = 4.243,P = 0.032)、(0.78±0.19,t = 11.341,P = 0.000)和(0.62±0.11,t = 13.455, P=0.000),P62蛋白/β-actin蛋白灰度值分别为(1.29±0.25,t=4.442,P=0.014)、(1.42±0.23, t=13.341,P=0.000)和(1.81±0.29,t=15.851,P=0.000).自噬诱导剂雷帕霉素可逆转HG诱导的hoechst33258阳性细胞增加,且逆转HG诱导的Bax表达升高:与Control组比较,HG组、HG和雷帕霉素共处理组、雷帕霉素组的Bax/β-actin灰度值分别为(1.51±0.31,t?= 14.342,P =0.000)、(1.42±0.23,t = 9.621,P = 0.004)和(1.81±0.12,t = 0.172,P = 0.124).结论 HG可促进心肌细胞H9c2凋亡,且能诱导自噬障碍,自噬诱导剂的运用逆转了HG对H9c2细胞的凋亡作用,表明自噬障碍是HG诱导H9c2细胞凋亡的重要机制.