人脐带间充质干细胞来源的微囊泡提取和鉴定

目的 研究分离和提纯人脐带间充质干细胞来源的微囊泡(hUC-MSCs-MVs)并分析其理化性质.方法 (1)运用I型胶原酶联合透明质酸酶消化Wharton's Jelly组织的方法,分离和扩增人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs);(2)实验组:用“饥饿法”处理hUC-MSCs,分离和提纯hUC-MSCs-MVs;对照组:用未经“饥饿法”处理的hUC-MSCs来尝试提取hUC-MSCs-MVs;(3)验证hUC-MSCs-MVs的理化性质和生物学特性.结果 (1)分离出的hUC-MSCs状态良好,扩增后的子代hUC-MSCs数量及状态满足后续实验的要求.流式细胞术结果显示hUC-MSCs-MVs高表达CD44、CD29和CD73,而低表达α-6 integrin (CD49f)和HLA-class Ⅱ(HLA-DR).(2)实验组成功分离和提纯了hUC-MSCs-MVs,而对照组未见确切hUC-MSCs-MVs产生;扫描电镜观察到hUC-MSCs-MVs的囊泡样结构,直径几十到几百am不等,均在1 tm以下;透射电镜观察到hUC-MSCs-MVs的产生和胞吐作用;蛋白定量结果为1337.1tg/ml;流式细胞术结果显示其大小绝大部分在1um以下,并能高表达CD44和CD29,而低表达CD73、α-6 integrin (CD49f)和HLA-class Ⅱ(HLA-DR)等表面分子.结论 用“饥饿法”处理hUC-MSCs可成功获得hUC-MSCs-MVs.