一种凋亡相关蚯蚓丝氨酸蛋白酶的纯化、活性鉴定及部分性质研究

通过多级柱层析,从赤子爱胜蚓抽提物(一组抗肿瘤活性蛋白成分)中纯化得到凋亡相关丝氨酸蛋白酶1(apoptosis-related serine protease 1, ARSP1),SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测得其表观分子质量为28 ku.ARSP1非变性PAGE图谱为相连的多条带,质谱图为多头峰,MALDI-TOF-MS测得各主峰相对分子质量为24 645,25 052和25 281,等电聚焦电泳测得等电点pI＜3.8.测得ARSP1 N端25个氨基酸序列为:I(V)IGGT(S)N(D)ASPGEFPWQLSQTRGGSHS,N端序列比较结果显示其与丝氨酸蛋白酶类高度同源.体外实验中,不仅通过凋亡细胞的相差显微观察验证了ARSP1的细胞杀伤活性,而且进一步通过荧光抗体技术对其直接杀伤细胞活性进行了定位研究.Schiffs试剂糖蛋白染色法鉴定ARSP1为糖蛋白(或糖肽),纤维蛋白平板法测得ARSP1同时具有纤溶酶和纤溶酶原激活酶活性,进一步通过苯甲磺酰氟(PMSF)对其纤溶酶活性的抑制实验,证明属于丝氨酸蛋白酶类.