树鼩原代小胶质细胞的分离培养、纯化与鉴定

本文旨在建立树鼩(Tupaia belangeri)小胶质细胞原代培养及纯化的方法,为利用新型实验动物树鼩进行相关研究工作提供实验材料.将新生树嗣大脑皮质机械分离,皮质组织块用胰蛋白酶消化后制成细胞悬液;培养9～10d后,分别采用直立手拍法、温和胰酶消化法以及恒温振荡法分离纯化树鼩小胶质细胞,通过差速贴壁进一步纯化.荧光显微镜下,利用小胶质细胞的特异性标记物CD11b抗体进行鉴定.结果 显示,小胶质细胞分离培养第3天时呈静息状态,表现为梭形、杆状、分支状等不规则形态.细胞免疫荧光CD11b呈阳性.不同纯化方法细胞免疫荧光并计数显示,直立手拍法所获得的细胞产量明显高于恒温振荡法(P＜0.05),细胞阳性率(＞96％)明显高于温和胰酶消化法(＞90％,P＜0.05).直立手拍法可获得产量及纯度高的树鼩原代小胶质细胞.