基于液质联用技术的环二核苷酸cGAMP定量检测方法的建立与评估
Letters in Biotechnology（2020）
摘要
目的:建立基于液质联用技术的定量检测环鸟苷酸-腺苷酸(cGAMP)的方法体系,用于评价细胞内DNA感受器环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)的活性.方法:在人白血病单核细胞系U937中,以脂质体转染鲱鱼精DNA(HT-DNA)的方式诱导cGAMP合成,采用甲醇-乙腈萃取法提取细胞中的cGAMP分子,真空干燥后利用液相色谱-质谱多反应监测技术(LC-MS/MRM)对cGAMP进行定量检测.同时利用蛋白质免疫印迹法和实时荧光定量PCR体系对细胞中cGAMP产生后的常规生物学效应指标进行检测,以评价该方法的可靠性.结果与结论:建立的基于液质联用技术检测方法实现了对细胞中cGAMP分子的定量分析.该方法具有特异性好、灵敏度高的特点,为深入研究cGAS的活性调控机制提供了技术支撑.
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