降钙素基因相关肽受体单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的:制备与鉴定抗降钙素基因相关肽受体(CGRPR)单克隆抗体.方法:构建GST-CGRPR胞外区融合表达载体,诱导表达后经GST亲和层析得到的重组蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术筛选阳性细胞株,通过腹水制备鼠源单克隆抗体,采用ELISA、SDS-PAGE、Western印迹和抗体分型试剂盒等方法进行分析鉴定.结果:纯化得到的GST-CGRPR胞外区融合蛋白纯度大于90％,筛选到2株针对CGRPR的单克隆抗体1F9、1F10,轻、重链均分别为κ型、IgG1型,细胞上清效价分别为1:3200、1:1600,腹水效价都达到105,抗体纯度均达到90％以上,且都以线性表位结合GST-CGRPR,亲和力常数分别为3.95×10-8、1.49×10-8 mol/L.结论:获得2株具有高亲和力针对CGRPR的单克隆抗体,为偏头痛治疗药物研发奠定了基础.