人Bcl2基因真核表达载体的构建及其抗凋亡功能研究

目的：构建带myc标签的Bcl2真核表达载体，获得myc-Bcl2融合蛋白，并对其生物学功能进行初步检测。方法：以本实验室保存的乳腺文库为模板，采用PCR技术扩增Bcl2编码序列，将其插入pCMV-myc载体，Western印迹检测表达情况；将重组质粒与空载体分别转染乳腺癌MCF-7细胞，通过流式细胞仪检测pCMV-myc-Bcl2重组质粒对细胞凋亡的影响。结果：双酶切和测序结果表明pCMV-myc-Bcl2真核表达质粒构建成功；转染293T细胞后myc-Bcl2蛋白成功表达；流式细胞仪检测结果显示，myc-Bcl2明显抑制乳腺癌细胞系的凋亡。结论：构建了带myc标签的人Bcl2真核表达载体，为进一步研究Bcl2在细胞凋亡中的功能奠定了基础。