柯萨奇病毒A组5型VP1蛋白原核表达及多克隆抗体的制备

目的:原核表达柯萨奇病毒A组5型(coxsackievirus A5，CV-A5)VP1蛋白，并制备抗VP1多克隆抗体(多抗)，为CV-A5相关定性定量研究制备试剂。方法:逆转录PCR扩增N端截短的CV-A5 VP1-ΔN56后，克隆至原核表达载体pGEX-6P-1，获得pGEX-6P-1-VP1-ΔN56。将其转化大肠埃希菌BL21(DE3)，表达重组蛋白并纯化。用纯化的谷胱甘肽巯基转移酶-VP1-ΔN56融合蛋白经背部皮下免疫日本大耳白兔，制备多抗。 结果:重组表达载体构建成功，融合蛋白以不可溶包涵体存在。ELISA、蛋白质印迹法检测表明，获得的兔多抗效价为10 7，可特异性识别重组和天然CV-A5 VP1蛋白。 结论:成功制备重组CV-A5 VP1蛋白及特异性多抗。为中和抗原表征研究及VP1定性定量分析奠定了基础。