狂犬病病毒滴度直接免疫荧光检测法的建立及验证

目的 建立检测狂犬病病毒(rabies virus,RV)滴度的直接免疫荧光法,并进行方法验证.方法 采用分步接种法和一步接种法两种细胞接种方式建立检测RV滴度的直接免疫荧光法.比较不同细胞接种方式检测结果的差异,并对建立的方法进行方法学验证,考察精密度和特异性指标,用统计学方法分析数据.结果 选择一步接种法作为直接免疫荧光法的细胞接种方式;2名操作人员14次检测结果的变异系数为0.04;运用该方法检测不同病毒,仅RV组出现特异性荧光灶,而非RV对照病毒组未观察到荧光灶.采用直接免疫荧光法和小鼠脑内滴定法检测RV样品的病毒滴度,两种方法结果之间呈较好的直线相关性(r=0.918),并有正向回归关系,直线回归方程:y=0.907x-1.566(t=12.80,P＜0.05).结论 直接免疫荧光法精密度良好,特异性强,操作简便,检测周期短,可用于RV滴度的定量检测.