维生素K3通过ROS介导细胞质酸化诱导Hela细胞凋亡

目的 利用维生素K3(VK3)复制氧化应激模型,探讨VK3诱导的ROS在Hela细胞溶酶体-线粒体细胞死亡途径过程中的作用及机制.方法 以人宫颈癌Hela细胞为研究对象,实验分为:对照组、VK3组(30 μmol/L)、NAC组(80 μmol/L)和VK3与NAC联合作用组.MTT法检测细胞生存率,DCFH-DA染色观察细胞内活性氧簇(ROS)水平,吖啶橙(AO)染色观察溶酶体膜通透性变化,BCECF-AM染色流式细胞术检测细胞质pH变化,罗丹明123(Rhodamine 123)染色检测线粒体膜通透性变化.结果 与对照组相比,单独应用NAC对Hela细胞无明显影响.VK3作用组Hela细胞生存率降低(P＜0.05),DCFH-DA染色荧光增强(P＜0.05),ROS水平增加;AO染色在VK3作用3h后Hela细胞的细胞质绿色荧光增强(P＜0.05),红色颗粒状荧光减弱(P＜0.05),溶酶体通透性增加;BCECF-AM染色,VK3作用6h后FL1/FL2比值降低(P＜0.05),细胞质呈酸性,酸性pH的细胞数为13.6％ (P＜0.05);Rhodamin染色,VK3作用6h后细胞质内红色荧光强度降低(P＜0.05),线粒体膜电势降低.与单独应用VK3组比较,VK3与NAC联合作用于Hela细胞时,细胞生存率增加(P＜0.05),ROS水平降低(P＜0.05),溶酶体通透性降低(P＜0.05),FL1/FL2比值增加(P＜0.05),酸性pH的细胞数为5.4％(P＜0.05),线粒体膜电势增加(P＜0.05).结论 在氧化应激诱导Hela细胞损伤过程中,VK3通过ROS依赖途径,诱导先后发生溶酶体及线粒体通透性增加,在这个过程中细胞质发生酸化.