人β-地中海贫血CD41-42型突变基因慢病毒载体的构建和293T的转染
Maternal & Child Health Care of China（2014）
摘要
目的:构建介导人β-地中海贫血CD41-42突变基因为目的基因的慢病毒载体,为基因治疗的细胞模型和转基因小鼠的建立提供基础.方法:抽提β-地中海贫血CD41-42突变纯合子患者的DNA,设计合成相应特异性引物,PCR扩增CD41-42突变基因,加上SphI和NotⅠ两个酶切位点进行T载体克隆,通过筛选获得重组质粒.用限制性内切酶将目的基因片段和LV5慢病毒载体连接,转入感受态细胞,筛选获得慢病毒表达载体LV5-βCD41-42,并进行测序.将慢病毒载体转染293T细胞,包装病毒,测定病毒浓度.结果:通过PCR获得长度为2128bp带有SphⅠ和NotⅠ序列的目的基因.pUC57载体和慢病毒表达载体LV5连接,慢病毒表达载体LV5-βCD41-42构建成功,序列正确.结论:成功构建并包装含β-地中海贫血CD41-42突变基因的人慢病毒.
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