外泌体对炎症性肠病调节巨噬细胞和肠道上皮细胞的影响

目的 通过检测炎症性肠病(IBD)患者肠外泌体(EVs)对上皮细胞和巨噬细胞的影响,研究EVs对IBD的影响.方法 选择2016年1月至2017年12月收治的40例IBD患者及肠镜未见异常,既往无慢性病史的正常人群20例作为健康对照组(HC组),每例入选者行肠镜检查时收集10 ml肠腔液(LAs),分离EVs.将EVs与结肠上皮细胞株(SW-480细胞系细胞)或者外周血单核细胞来源的巨噬细胞共培养,分别采用qRT-PCR及ELISA法检测LAs中EVs裂解液中细胞因子mRNA表达水平及其蛋白含量,及与EVs共培养的结肠上皮细胞及巨噬细胞吞噬肠EVs后细胞因子mRNA表达水平和蛋白水平,并行巨噬细胞迁移实验探讨EVs对巨噬细胞功能的影响.结果(1)与健康受试者(HC)比较,IBD患者LAs中EVs (IBD-EVs)裂解液中白介素(IL)-6、IL-8、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA及蛋白表达水平均显著升高,转化生长因子β(TGF-β)及黏蛋白-2(MUC-2)mRNA及蛋白表达水平均显著降低.(2)与IBD-EVs共培养的结肠上皮细胞吞噬EVs后IL-6、IL-8、TNF-α的mRNA表达水平及其蛋白水平均显著高于与HC-EVs共培养的水平,而TGF-β及MUC-2 mRNA及蛋白表达水平均显著低于与HC-EVs共培养时的水平,巨噬细胞吞噬肠腔EVs后细胞因子水平变化与上皮细胞类似,且IBD患者EVs显著提升巨噬细胞的迁移率.结论IBD患者肠腔中释放的EVs的内含物与健康受试者不同,体外实验表明IBD-EVs具有促进肠道上皮细胞、巨噬细胞发生炎症的作用,而该类小体的稳定性及其包含的mRNA及蛋白谱等特性可能作为临床诊断IBD时潜在的标志物.