应用芯片式数字PCR检测人血清中登革病毒载量

目的 建立芯片式数字PCR绝对定量技术,用于登革病例血清中登革病毒载量绝对定量并分析载量变化情况.方法 选取发病1～7d登革实验室确诊病例血清样本,提取病毒RNA并逆转录为cDNA,取3μL或4.5μL cDNA,配制15μL反应体系,采用QuantStudio 3D Digital PCR Chip Loader仪器制作芯片,将芯片置于Dual Flat Block GeneAmp PCR System 9700运行PCR,最后在QuantStudio TM3D Digital PCR System中读取结果并应用QuantStudio TM 3D AnalysisSuite TM Software进行分析,根据实验稀释倍数计算血清中登革病毒载量.结果 芯片制作良好,有效孔数高,检测结果重复性较好,示病例发病第1～7d血清中的登革病毒载量分别是107.646,107.544,107.298,106.990,105.823,104.732,104.221 copies/mL.结论 应用芯片式数字PCR检测血清中登革病毒载量的方法可行,可应用于登革病毒载量的绝对定量.登革病毒载量随着病程的发展而降低.