子宫内膜异位症患者腹腔液和肿瘤坏死因子-α对颗粒细胞功能和自噬的影响

目的 研究腹膜型 Ⅰ～Ⅱ 期子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)患者腹腔液与肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)对体外培养的颗粒细胞的功能和自噬的影响,从而探讨腹膜型EMS的不孕原因.方法 体外培养人卵巢颗粒细胞系KGN,分别加入EMS患者腹腔液(EMS组)和重组TNF-α 蛋白(浓度分别为1μg/L、10μg/L、100μg/L)(TNF-α 组)处理细胞,以非EMS患者腹腔液作对照组.采用CCK-8法检测细胞增殖水平,流式细胞术和线粒体膜电位检测细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养液雌二醇和孕酮水平,蛋白质印迹法检测自噬标志物LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ 和p62,透射电子显微镜观察自噬小体数量.结果 加入EMS患者腹腔液可抑制KGN颗粒细胞增殖(P<0.001),促进颗粒细胞凋亡(P=0.009),减少雌、孕激素的分泌(P<0.001,P=0.005);EMS患者腹腔液和高浓度重组TNF-α蛋白可促进颗粒细胞自噬标志物LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ 比值上升(P<0.001),p62蛋白减少(P<0.05),自噬体数量增加(P<0.001),自噬过度激活.结论 EMS患者腹腔液和TNF-α 通过抑制卵巢颗粒细胞增殖、促进凋亡,影响雌、孕激素的分泌和过度自噬等多个环节影响颗粒细胞的功能,进而可能通过颗粒细胞的旁分泌和自分泌功能影响卵子质量、受精及随后的胚胎发育和胚胎着床,从而导致EMS患者不孕.