人卵透明带蛋白huZP3a22～176和huZP3b177～348肽段在大肠杆菌中的表达及其纯化

目的:探索将huZP3a22～348蛋白编码基因拆分成两段,分别表达的可行性,并研究表达产物的免疫原性.方法:用PCR技术,将去N-端信号肽和C-端跨膜区的huZP322～348蛋白编码基因拆成大小相近的两段,以完整阅读框的形式分别重组插入热诱导型pBV221的多克隆区.结果:大肠杆菌分别特异地表达了可单独或复合应用的huZP3a22～176和huZP3b177～348,在经过抗人ZP3不同抗原区合成肽抗体的蛋白印迹鉴定后,用改良的制备性PAGE方法分离纯化这两种表达产物.同时用兔抗猪ZP IgGs蛋白印迹试验表明,huZP3a和pZP3b的几个共同线性抗原表位都存在于其肽链的前半区域.结论通过基因重组技术可获得足够量的huZP3a和huZP3b,这为开展huZP3a和huZP3b的免疫原性以及huZP3诱发人精子顶体胞吐的功能域等研究奠定了基础.