检测气单胞菌属的SYBR Green荧光PCR方法的建立和评价

目的 建立一种检测气单胞菌的SYBR Green荧光PCR方法.方法 使用文献报道的气单胞菌属16S rRNA基因扩增引物,建立SYBR Green荧光PCR检测方法,评价其特异性、灵敏度和实际应用价值.结果 SYBR Green荧光PCR方法的检测下限为10-7 ng/ml,检测的21株气单胞菌均为阳性,检测的弧菌、大肠埃希菌、沙门菌、小肠结肠炎耶尔森菌、志贺菌均为阴性.针对104份健康人群粪便样本,8.65％的样本分离到气单胞菌,28.85％的样本SYBR Green荧光PCR方法检测阳性.其中8份标本采用2种方法检测均为阳性.样本核酸检测阳性后再进行病原菌的分离,会漏检1份样本(11.11％),但可以减少71.15％(74/104)的分离培养及鉴定工作.结论 SYBR Green荧光PCR方法具有很好的特异性和敏感度,用于大样本的早期筛查可以减少70％左右的工作量,适合应用于气单胞菌感染和携带的监测.