基于单基因的实时荧光定量反转录-聚合酶链反应定性检测猪霍乱沙门菌

目的 建立基于单基因的猪霍乱沙门菌的实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)检测方法.方法 通过对猪霍乱沙门菌基因组及其他血清型沙门菌基因组、人类基因组的生物信息学比对及普通PCR检测分析,获得猪霍乱沙门菌特有而其他细菌及人类基因组中不存在的特异基因SC1242,针对该基因设计特异性引物,通过优化反应条件,建立检测该靶基因的rRT-PCR方法,利用123株多种血清型沙门菌及非沙门菌菌株RNA评价该方法的特异性及敏感性.同时对猪霍乱沙门菌全血模拟标本进行敏感性检测.结果 利用该方法检测20株猪霍乱沙门菌均为阳性,其余菌株均扩增阴性.对纯菌RNA检测中,rRT-PCR的最低检测限度为50 fg/反应,约为96个拷贝/反应.在以全血模拟样品提取核酸为模板的检测中,敏感性达90 cfu/ml.结论 rRT-PCR方法检测猪霍乱沙门菌特异性好、灵敏度高,对猪霍乱沙门菌的早期诊断具有潜在应用价值.