半乳糖凝集素-1对结核分枝杆菌感染巨噬细胞的调节作用及其临床价值

目的 分析半乳糖凝集素-1(galectin-1,Gal-1)对结核分枝杆菌(MTB)感染巨噬细胞的调节作用,并探讨其血清含量与结核病的临床相关性.方法 选取2014年6-12月于同济大学附属上海市肺科医院门诊就诊的活动性结核病患者40例作为病例组;选取同时期结核菌素皮肤试验(tuberculin skin test,TST)阳性潜伏感染者20例作为观察组;参照观察组患者的年龄和性别构成,按照1∶1的比例,选择同期体检TST阴性健康者20名作为对照组.研究对象各采集外周血5 ml,采用ELISA检测其血清Gal-1含量;分别采用蛋白质免疫印迹(Western blot)和ELISA检测MTB感染人单核巨噬细胞(THP-1)后,Gal-1的表达及分泌情况;应用流式细胞术检测外源性Gal-1(设置添加10、50 ng/ml的Gal-1组和空白对照组)对人单核巨噬细胞(THP-1)吞噬表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的MTB(MTB-GFP)的影响;应用胞内存活实验检测外源性Gal-1对巨噬细胞清除MTB能力的作用.结果 血清Gal-1含量病例组为(28,30±1.17) ng/ml,高于对照组的(21.28±1.74) ng/ml和观察组的(22.06±1.25) ng/ml,差异有统计学意义(F=5.50,P=0.006).MTB感染THP-1细胞2h后,Gal-1表达量增加.感染复数(multiplicity of infection,MOI)值为1和5时,细胞培养液上清液中Gal-1含量分别为(391.27±34.45) pg/ml和(751.54±148.93) pg/ml.添加10、50 ng/ml Gal-1组与空白对照组MTB-GFP阳性THP-1细胞的比率分别为(6.77±0.58)％、(6.93±0.62)％和(7.64±0.74)％,三组比较差异无统计学意义(F=1.53,P=0.291);MTB-GFP阳性THP-1细胞的平均荧光强度分别为321.67±5.03、318.00±13.89、342.67±13.65,三组比较差异无统计学意义(F=3.94,P=0.081).感染24 h后,添加10 ng/ml和50 ng/ml Gal-1组胞内克隆形成单位数[M(Q1～Q3)]分别为3250 (2825～6225)、3250 (1850～4950),与空白对照组[9250(8525～111 550)]比较,差异有统计学意义(U=0.00,P=0.029;U=0.00,P=0.028);感染72 h后,分别为19 500(17 500～21 500)、12 000(11 250～15 750),与空白对照组[38 500(31 750～44 500)]比较,差异有统计学意义(U=0.00,P=0.029;U=0.00,P=0.029).结论 活动性结核病患者血清中Gal-1表达水平异常升高,胞外Gal-1可增强巨噬细胞对MTB的杀伤功能.因此,Gal-1具有一定的结核病辅助诊断价值,并可能通过影响巨噬细胞功能参与结核病发病过程.