马西利亚分枝杆菌临床分离株的多位点序列鉴定和药物敏感性试验分析

目的 对单基因比对不能区分的马西利亚分枝杆菌(M.massiliense)临床分离株进行菌种鉴定,补充其药物敏感谱,为临床诊治提供依据.方法 2013年中国疾病预防控制中心传染病预防控制所结核病室共收集了47例疑似非结核分枝杆菌(NTM)感染的临床样本,用对硝基苯甲酸、噻吩-2-羧酸肼培养基和多位点PCR方法区分鉴别得到的分枝杆菌,采用基因序列比对进行NTM菌种鉴定,其中未能准确鉴定菌种的6株临床分离株进一步通过多位点序列分析(MLSA)方法进行定种鉴定.采用微孔板阿尔玛蓝测定法(MABA)对马西利亚分枝杆菌菌株开展36种药物的药物敏感性试验(简称“药敏试验“).结果 47例临床样本中鉴定出34株NTM,其中6株临床分离株综合5个管家基因(16S rRNA、hsp65、rpoB、sodA和recA)的单基因比对结果仍不能鉴定菌种,因此本研究采用MLSA方法构建邻位相加法进化树确认6株均为马西利亚分枝杆菌.药敏试验结果显示M.massiliense对阿米卡星为敏感(16 μg/ml)或中度敏感(32 μg/m1),对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、环丙沙星、乙硫异烟胺、卷曲霉素、对氨基水杨酸、氧氟沙星、卡那霉素、环丝氨酸、美罗培南、米诺环素12种药物耐药.结论 MLSA方法能有效鉴定马西利亚分枝杆菌;马西利亚分枝杆菌耐药程度较高.