复制型重组痘苗病毒TTK-EG特异性T细胞表位研究

目的 筛选和确定TTK-EG包含的H-2d限制的HIV-1特异性T细胞表位.方法 6～8周龄雌性BALB/c小鼠0周时分别经肌肉注射、皮内注射和滴鼻途径免疫5×106 PFU TTK-EG,间隔4个月进行加强免疫.末次免疫后2周取小鼠脾细胞,采用IFN-γ ELISPOT方法筛选HIV-1 Env和Gag肽库,反应阳性的肽库进行第二轮单肽筛选.用流式细胞术(胞内因子染色,intracellular cytokine staining,ICS)对筛选出的单肽进行验证(小鼠免疫途径为肌肉注射),确定H-2d限制的HIV-1特异性T细胞表位.结果 经过ELISPOT筛选和ICS验证,确定2条Env多肽(gp140-9,氨基酸位点60～77;gp140-74,氨基酸位点548～565)和3条Gag多肽(Gag-49,氨基酸位点196～210;Gag-64,氨基酸位点256～270;Gag-65,氨基酸位点260～274)包含H-2a限制的HIV-1特异性T细胞表位,其中gp 140-74(IVQQQSNLLRAIEAQQHL)是首次发现的H-2d限制的HIV-1特异性T细胞表位.Env、Gag优势表位肽与Env、Gag全肽池刺激小鼠T细胞分泌IFN-γ、IL-2、TNF-α三种细胞因子的能力基本相同.结论 Env多肽gp 140-9、gp140-74和Gag多肽Gag-49、Gag-64、Gag-65包含H-2d限制的T细胞表位,可用于重组痘苗病毒TTK-EG的T细胞免疫研究.