实时荧光定量PCR法快速检测食品中大肠埃希菌

目的 应用实时荧光定量PCR技术,结合3～5h的前增菌处理,建立食品中大肠埃希菌的快速、灵敏、定量的检测方法.方法 以大肠埃希菌(ATCC 25922)为参考菌株,对培养基和培养温度进行优化,选择最佳的前增菌培养条件.将不同浓度的参考菌株和样品分别接种前增菌液中培养3～5h.采用Triton-X 100提取增菌后的DNA,实时荧光定量PCR扩增大肠埃希菌特异性片段.所得Ct与对应的原始(增菌前)参考菌株的浓度,建立标准曲线,计算样品中大肠埃希菌的数量.结果 纯培养模式下,经过3、4和5h的前增菌后,标准曲线具有很好的线性,r2分别为0.996、0.992和0.991,对应的检测限为136、14和1.4 cfu/100 ml;含杂菌培养模式下,NB和EC肉汤42.0℃增菌4h后,建立的标准曲线r2分别为0.972和0.978.在不同食品中该方法的加标回收率为74.0％～174.0％.结论 3～5h的前增菌实时荧光定量PCR方法可以快速、灵敏、定量地检测食品中活的大肠埃希菌.