草莓中诺如病毒和甲肝病毒的多重实时荧光逆转录PCR检测方法的建立

目的 建立草莓中诺如病毒GⅠ、诺如病毒GⅡ和甲肝病毒等3种食源性病毒的多重实时荧光RT-PCR检测方法,并应用于实际样品检测.方法 对草莓样品进行前处理、病毒富集、病毒RNA提取和纯化后,先采用单重实时荧光RT-PCR进行检测,随后进行多重实时荧光RT-PCR反应条件优化,建立多重实时荧光RT-PCR检测方法并分析其特异性和灵敏度.结果 所采用的病毒富集和核酸提取方法可以实现病毒的有效富集和抑制剂的去除,建立的多重实时荧光RT-PCR方法特异性强(100％),对草莓样品中诺如病毒GⅠ、诺如病毒GⅡ和甲肝病毒的检测灵敏度分别为56.2 RT-PCR50/20 g、31.6 RT-PCR50/20 g和31.4 CCID50/20 g.同时对50份样品进行检测,结果均为阴性.结论 所建立的检测方法快速、灵敏、特异性强,适用于草莓产品中诺如病毒GⅠ、诺如病毒GⅡ和甲肝病毒的同时检测.