丝状真菌MALDI-TOF MS鉴定中三种样品前处理方法比较

目的 探讨适用于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)鉴定丝状真菌的样本预处理方法.方法 分别使用甲酸萃取法、液氮研磨法、液氮研磨和甲酸萃取相结合三种方法对35株丝状真菌进行破壁,用牛鲍计数板进行破壁率计算,采用单因素方差分析(F检验)比较三种方法的破壁率;MALDI-TOF MS分别测定三种方法预处理的样本,采用卡方检验(x2检验)分析比较三种方法的鉴定效果.结果 在普通光学显微镜下,经液氮研磨的丝状真菌可见大量被碾碎的孢子和菌丝渣子,背景浑浊不清,偶见完整孢子;液氮研磨法和(液氮研磨+甲酸萃取法)的破壁率分别为(0.86±0.06)和(0.84±0.06),均高于甲酸萃取法(均P＜0.001).以(形态学+分子生物学鉴定)为金标准,经质谱鉴定,将35株丝状真菌鉴定到种和属的鉴定率:液氮研磨法为71％和14％,甲酸萃取法为54％和23％,(液氮研磨+甲酸萃)取法为86％和8％;(液氮研磨+甲酸萃取法种的鉴定效果优于甲酸萃取法,差异有统计学意义(x2=8.231,P=0.016),而液氮研磨法与甲酸萃取法和(液氮研磨+甲酸萃取法)在种的鉴定率上均无统计学差异(其x2=2.203和xs2=2.121,P=0.214和P=0.192.).结论 液氮研磨破壁效果好,(液氮研磨+甲酸萃取法)是质谱鉴定丝状真菌良好的样本预处理方法,值得临床推广应用.