扎伊尔型埃博拉病毒实时荧光定量PCR方法的建立

目的 建立扎伊尔型埃博拉病毒实时荧光定量PCR快速检测技术.方法 人工合成扎伊尔型埃博拉病毒包膜糖蛋白GP基因上1 969～2 113 bp的保守特异片段,克隆到pUC57重组质粒中,构建阳性模板;以103～ 109拷贝数的重组质粒样品共7组作为标准品,制作标准曲线;设计上游引物5'-GAACCACATGATTGGACCAAGA-3'、下游引物5'-TAACTCCAATACCTGCCGGTATC-3'及TaqMan探针FAM 5'-TTGTTGATAAAACCCTTCCGGACCAGG-3'BHQ1,采用普通PCR和实时荧光定量PCR,检测其特异性和灵敏度.结果 克隆出含GP 1 969～2 113 bp片段的阳性重组质粒pUC57-GP,其浓度为97.75 ng/μl;以pUC57-GP为标准品,制备标准曲线,拷贝数为103～109 copies/μL有较好线性关系,相关系数R2=0.999;能特异性检测扎伊尔型埃博拉病毒,而与Ⅰ型登革病毒、寨卡病毒无交叉反应,其检测最低拷贝数达3.10×101copies/μl.结论 建立了扎伊尔型埃博拉病毒荧光定量PCR快速检测技术,具有快速、灵敏、特异、定量检测等特点,可为埃博拉疫情的综合防控提供技术支撑.