3β-HSD基因高表达细胞株建立及其对DEHP致凋亡影响研究

目的 构建3β-HSD高表达细胞株,研究3β-HSD高表达对塑化剂DEHP致凋亡的影响.方法 根据GenBank上3β-HSD基因cDNA序列设计引物,PCR扩增该基因并将其克隆到慢病毒载体pLVX-CMV-ZSgreen-PGK-Puro,然后转染至MCF-7细胞中,对细胞株进行鉴定.用不同剂量DEHP对3β-HSD高表达细胞和MCF-7细胞染毒24h,在基因和蛋白表达水平上检测Bax、Caspase-3、Caspase-8的变化.结果 基因测序验证本文构建的3β-HSD基因高表达载体基因序列与GenBank中的序列一致,荧光定量PCR结果显示3β-HSD基因表达水平升高105倍,western blot结果显示3β-HSD蛋白表达水平升高80％.DEHP染毒MCF-7细胞后,Bax、Caspase-3、Caspase-8基因表达水平比对照组分别升高28％～54％、13％～49％、21％～70％,BAX、CASPASE-3、CASPASE-8蛋白表达水平比对照组分别升高28％～61％、40％～48％、31％～84％.DEHP染毒3β-HSD高表达细胞后,Bax、Caspase-3、Caspase-8基因表达水平比对照组分别升高39％～75％、22％～30％、32％～45％,BAX、CASPASE-3、CASPASE-8蛋白表达水平比对照组分别升高8％～33％、19％～32％、10％～21％.结论 本文成功构建3β-HSD基因高表达细胞株; DEHP可引起MCF-7细胞和3β-HSD高表达细胞凋亡基因及蛋白发生改变,本文结果提示3β-HSD基因在一定程度上促进DEHP的致凋亡作用.