EMA和qPCR结合检测食品中活性肠出血性大肠杆菌O157∶H7方法研究

目的 将叠氮溴化乙锭(EMA)与双重荧光PCR技术结合,建立EMA荧光PCR方法,快速检测食品中活性大肠杆菌O157∶H7.方法 在已建立大肠杆菌O157∶H7双重荧光PCR方法的基础上,优化EMA作用浓度、时间;观察EMA对活菌扩增的影响;利用模拟样品和现行检测方法做比较.结果 30 μg/ml的EMA与细菌作用、曝光各15 min,可抑制4×106 CFU/ml O157∶H7死菌DNA的扩增;O157:H7活菌浓度＞4×105 CFU/ml时,EMA对活菌扩增有一定影响,离心可以降低其影响;活菌数/死菌数≥20％时,可以检出活菌;当活菌数量足够大时,死菌的存在不影响活菌的检出;EMA荧光PCR方法检测模拟样品,结果与现行的细菌分离培养金标准SN/T 0973-2010始终保持一致.结论 建立的EMA荧光PCR方法可准确鉴定活态大肠杆菌O157:H7,避免死菌DNA造成的假阳性,在食品检测中具有一定的应用价值.