3种细胞共培养分离单纯疱疹病毒及培养物快速鉴定方法的建立

目的 建立狗肾细胞(MDCK)、人喉癌表皮细胞(Hep-2)和非洲绿猴肾细胞(Vero)共培养(下简称MHV细胞)分离单纯疱疹病毒(HSV)并用荧光PCR的CT值梯度参考曲线鉴定培养物的方法.方法 选取1株某实验室保存的单纯疱疹病毒分离株,用培养液以5倍梯度倍比稀释成多个模拟样品.用此样品同时接种MHV细胞和Vero细胞,每个样品各接种5瓶,并设空白对照和无细胞对照.经37℃、8％CO2培养后,每隔12h记录上述各组的细胞病变效应(CPE),培养在84 h后终止,所有培养物同批提取核酸,并用荧光PCR检测RNA.所有核酸同机检测,并记录CT值,无细胞对照组的CT值用软件制成梯度参考曲线,其余各组与梯度参考曲线对比.结果 MHV细胞和Vero细胞培养模拟样品后,均出现典型细胞病变,Vero细胞出现更晚,MHV组CT值低于Vero组和无细胞对照组(P＜0.05),MHV组的CT值曲线位于梯度参考曲线的下方.结论 HSV病毒可以在MHV细胞内有效增殖,同一样品的CT值梯度参考曲线可用来客观评价该样品中病毒在细胞内的增殖.