幽门螺杆菌塑性区hp4565基因的克隆表达及其功能初探

Modern Preventive Medicine(2015)

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摘要
目的 为克隆表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)临床株的塑性区hp4565基因,并制备抗体,以探讨其生物学功能.方法 以标准株NCTC shfi470的hp4565基因组全长设计引物,以H.pylori临床株为模板,PCR扩增临床株中hp4565基因,经原核表达后,选定最适条件大量诱导表达并经Ni2+-NTA柱纯化的目的蛋白.用MTT法检测重组蛋白对胃上皮细胞GES-1增殖影响,定磷法检测重组蛋白ATP酶活力.用纯化蛋白为抗原免疫家兔后制备多克隆抗体,ELISA检测抗体效价.结果 成功克隆表达了hp4565基因,全长942 bp,编码313个氨基酸,原核表达后SDS-PAGE电泳显示有41 kDa的融合蛋白,Western blot鉴定是预期HP4565蛋白.纯化后获得较高纯度的重组蛋白,MTT法结果显示HP4565蛋白在低浓度(≤40 mg/L)时对细胞增殖无明显影响;蛋白浓度在60 mg/L以上时,细胞增殖随着培养时间的延长和浓度的增加呈现逐渐降低的趋势;重组蛋白具有一定的ATP酶活力,免疫家兔制备的多克隆抗体效价为1:1.6×105.结论 成功克隆表达了H.pylori临床株塑性区hp4565基因,得到纯度较高的蛋白和滴度较高的抗体,重组蛋白对胃上皮细胞增殖有一定影响,并具有一定的ATP酶活力.
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关键词
Helicobacter Pylori,Gene,Cloning and expressing,Cell proliferation,ATPase
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