X-连锁慢性肉芽肿病的植入前遗传学诊断方法学研究

目的:采用多重置换扩增(MDA)建立一种可靠、准确的植入前遗传学诊断(PGD)方法,可应用于X-连锁慢性肉芽肿病的PGD.方法:采用16个位于CYBB基因两侧的短串联重复序列(STR)位点对X-连锁慢性肉芽肿病家系进行单体型分析,采用MDA对单细胞进行全基因组扩增,对其产物采用在家系分析中具有多态性的STR位点及特异性扩增CYBB基因进行分析,同时采用位点Amel进行性别诊断.结果:家系分析结果显示共有7个STR位点具有多态性.共进行了10个单淋巴细胞及10个单卵裂球的MDA,全部扩增成功.对致病基因CYBB外显子8的聚合酶链反应(PCR)扩增效率为100％,其中1个单淋巴细胞发生致病位点的等位基因脱扣(ADO),10个单卵裂球诊断结果均为215 bp,未检测出异常的204 bp条带,ADO率为10％(1/10);对于7个有多态性的STR位点和位点Amel,PCR扩增效率为96.9％(155/160),ADO率为11.3％(13/115).结论:采用MDA结合致病基因特异性扩增及单体型分析在单细胞水平对X-连锁慢性肉芽肿病进行检测,两者相结合可避免污染、ADO等导致的误诊,可提高PGD的诊断效率,为进一步的临床应用奠定了基础.