稳定表达H1N1流感病毒核糖核蛋白的Hela细胞株的建立

目的 构建稳定表达H1N1流感病毒核糖核蛋白的Hela细胞株,为抗病毒药物筛选提供细胞模型.方法 利用基因重组技术构建四种重组真核表达载体pcDNA3.1/Zeo-PB1、pcDNA3.1/Hygro-PB2、pcDNA3.1/Neo-PA、pEF6/V5-HisA-NP,进行PCR和DNA测序鉴定;使用Hela细胞依次进行四种抗生素Zeocin、Hygromycin B、Geneticin(G418)、Blasticidin S HCl最小致死浓度实验,获得其最佳筛选浓度;利用Lipofectamine 2000将四种重组真核表达载体依次转染Hela细胞,并添加相应抗生素筛选稳定表达核糖核蛋白细胞株;RT-PCR以及POL Ⅰ系统鉴定Hela细胞株是否稳定表达H1N1流感病毒核糖核蛋白.结果 RT-PCR初步鉴定流感病毒核糖核蛋白基因片段稳定整合在宿主基因组中,POL Ⅰ系统证实核糖核蛋白在Hela细胞中已经获得了功能性表达.结论 成功构建了Hela-核糖核蛋白细胞株,为以流感病毒RNA聚合酶复合体为靶点的抗流感病毒药物的研究提供了细胞模型.