问号钩端螺旋体LipL32-LipL41融合基因的克隆与原核表达

目的 构建钩端螺旋体融合基因lipL32-lipL41重组表达质粒,并获得重组表达的融合蛋白.方法 设计引物,聚合酶链反应(PCR)从各参考标准株中扩增LipL32、LipL41基因,连接引物PCR法构建LipL32-LipL41融合基因,连接到大肠杆菌表达载体pET28a上,构建pET28a-LipL32-LipL41重组质粒,并转化到大肠杆菌DE3菌株中进行诱导表达,聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western blot鉴定融合蛋白的表达.结果 扩增获得的LipL32-LipL41融合基因为1900 bp,原核表达重组质粒PET28a-LipL32-LipL41经酶切鉴定含有融合基因片段,在大肠杆菌中表达出Mr 90000左右的重组融合蛋白LipL32-LipL41.结论 成功构建钩体LipL32-LipL41融合基因,并在大肠杆菌中成果表达融合蛋白,为进一步评价LipL32-LipL41作为候选抗原诊断钩端螺旋体病的价值奠定基础.