肺孢子菌基因LAMP检测方法的建立

目的 建立检测肺孢子菌基因的特异性环介导等温扩增(LAMP)方法,以期为临床检测肺孢子菌感染提供简便敏感的新方法.方法 依据肺孢子菌核内核糖体小亚基16s rRNA保守序列设计特异性引物,建立检测肺孢子菌基因的LAMP和PCR反应体系.以实验感染肺孢子菌大鼠模型为检测对象,以倍比稀释的重组肺孢子菌基因组DNA质粒为模板,并与PCR方法对比,检验LAMP的敏感性;用呼吸道感染常见的7种病原体(光滑念珠菌、近平滑念珠菌、热带假丝酵母菌、白色念珠菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌MRSA株、支原体FH株)作对照,检测LAMP方法的特异性.结果 本研究建立的LAMP法检测肺孢子菌基因的最低检出拷贝数为50 copies/ml,敏感性高于普通PCR最低检出拷贝数(104 copies/ml);检测肺孢子菌基因的特异性强,不与其他7种病原发生交叉反应.结论 本研究成功地建立了特异性好,敏感性高的肺孢子菌基因LAMP检测方法.并显示检测程序简单,结果观察方便,且不需要特殊设备等优点.适用于临床肺孢子菌定植或感染的检测.